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   大连医科大学学报  2022, Vol. 44 Issue (1): 35-39      DOI: 10.11724/jdmu.2022.01.07
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TGF-β2和CD105在卵巢浆液性癌组织中的表达及临床意义
刘远远, 姜丹, 刘畅, 于水, 张嘉栗, 王梦瑶, 邹娜    
大连市妇女儿童医疗中心(集团) 病理科,辽宁 大连 116000
摘要目的 探讨转化生长因子-β2(TGF-β2)和内皮糖蛋白(CD105)在卵巢浆液性癌组织中的表达及临床意义。方法 运用免疫组化SP法检测50例卵巢浆液性癌手术切除标本中TGF-β2和CD105的表达情况,并分析它们与临床病理参数之间的关系。结果 (1) TGF-β2在卵巢浆液性癌中的阳性率为82%,与癌组织的FIGO分期及淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄及病理分级无关(P>0.05);(2)CD105标记的微血管密度(CD105-MVD)在卵巢浆液性癌中为11.12±1.97,与癌组织的病理分级、FIGO分期及淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄无关(P>0.05);(3)TGF-β2和CD105在卵巢浆液性癌组织中表达呈显著正相关(r=0.570,P<0.05)。结论 TGF-β2和CD105与卵巢浆液性癌的病情进展密切相关,二者联合检测有助于判断卵巢浆液性癌的生物学行为和预后评估。
关键词卵巢浆液性癌    TGF-β2    CD105    MVD    
Expression and clinical significance of TGF-β2 and CD105 in ovarian serous carcinoma
LIU Yuanyuan, JIANG Dan, LIU Chang, YU Shui, ZHANG Jiali, WANG Mengyao, ZOU Na    
Department of Pathology, Dalian Municipal Women and Children Medical Center(Group), Dalian 116000, China
Abstract: Objective To investigate the expression and clinical significance of transforming growth factor-β2 (TGF-β2) and endoglin (CD105) in ovarian serous carcinoma. Methods The expression of TGF-β2 and CD105 in 50 cases of serous ovarian carcinoma was detected in surgically resected specimens by SP immunohistochemical method, and their relationship with clinicopathological parameters was analyzed. Results The positive rate of TGF-β2 in ovarian serous carcinoma was 82%, which was correlated with FIGO stage and lymph node metastasis (P < 0.05), but not correlated with age and pathological grade (P>0.05); CD105-MVD was 11.12±1.97 in ovarian serous carcinoma, which was correlated with pathological grade, FIGO stage and lymph node metastasis (P < 0.05), but not correlated with age of the patients (P>0.05); The expression of TGF-β2 and CD105 in ovarian serous carcinoma was positively correlated (r=0.570, P < 0.05). Conclusion TGF-β2 and CD105 are closely related to the progression of ovarian serous cancer, and the combined detection of TGF-β2 and CD105 could be helpful to evaluate the biological behavior and prognosis of serous ovarian carcinoma.
Keywords: ovarian serous carcinoma    TGF-β2    CD105    MVD    

卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤,其中浆液性癌是最常见的病理类型,因其早期症状不典型,多数患者确诊时病情已进展至晚期,因此,寻找有助于卵巢浆液性癌早期诊断、监测疾病进展的指标具有重要的临床意义。肿瘤的生长和转移依赖于新生血管的生成[1],转化生长因子β(TGF-β)是一种多功能的细胞生长因子,在调节细胞增殖和分化、促进肿瘤新生血管形成及在肿瘤的发生发展中起重要作用[2]。内皮糖蛋白(CD105)是一种表达在血管内皮细胞与增殖有关的细胞膜抗原,被认为是新生血管最有价值的标志物[3]。TGF-β2是TGF-β的一个主要亚型,目前有关TGF-β2和CD105在卵巢浆液性癌中表达的相关研究少有报道。本研究采用免疫组化SP法检测TGF-β2和CD105在50例卵巢浆液性癌组织中的表达,探讨它们在卵巢浆液性癌中的表达特点及其与临床病理参数的关系。

1 资料与方法 1.1 一般资料

收集大连市妇女儿童医疗中心(集团)病理科2015—2020年间病理诊断为卵巢浆液性癌的手术切除标本50例。患者年龄35~71岁,平均年龄53.8岁,中位年龄53.5岁。所有患者均行肿瘤减灭术,术前均未进行化疗。病理分级采用第五版WHO女性生殖器官肿瘤分类提出的两级分类标准[4]。低级别:通常呈小巢、腺样、乳头或微乳头以及极性反转的微乳头结构,周围常见空隙和裂隙,核呈轻-中度异型性,核大小差异 < 3倍,偶有中央核仁,核分裂象通常1~2个/mm2,等同于0.55 mm直径视野和0.24 mm2面积中3~5个/10 HPF,常见砂粒体。高级别:通常呈实性、乳头状、迷宫样(有裂隙样腔隙)、腺样和筛状区域,核大,显著异型性,核大小差异>3倍,核分裂象活跃,常>5个/mm2,等同于0.55 mm直径视野和0.24 mm2面积中>12个/10 HPF,常见坏死和多核细胞。本组患者低级别12例,高级别38例,见图 1。FIGO临床分期Ⅰ~Ⅱ期16例,Ⅲ~Ⅳ期34例。有淋巴结转移29例,无淋巴结转移21例。

A.卵巢低级别浆液性癌,肿瘤呈细乳头状生长,细胞核呈轻-中度异型性,核分裂象1~2个/mm2;B.卵巢高级别浆液性癌,肿瘤呈乳头状生长,细胞核异型性明显,核分裂象>5个/mm2 图 1 卵巢浆液性癌的病理分级(×100, 3.8 mm2) Fig 1 Pathological grading of serous ovarian carcinoma(×100, 3.8 mm2)
1.2 试剂与方法

所有标本均经10%甲醛溶液固定,常规石蜡包埋,4 μm切片,按照试剂盒说明书进行免疫组化染色。本研究所用兔抗人TGF-β2多克隆抗体(1∶1 000)购自英国Abcam公司,鼠抗人CD105单克隆抗体(1∶150)及免疫组化检测试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司,以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定

TGF-β2阳性表达判定:胞浆呈棕黄色判定为阳性,在400倍视野下(0.24 mm2)观察5个不同区域,同时计算阳性细胞的百分比,阳性细胞百分比 < 10%为阴性,≥10%为阳性。

CD105阳性表达判定:血管内皮细胞膜或胞浆呈棕黄色染色判定为阳性。凡棕黄色单个内皮细胞或内皮细胞簇均为1个血管计数,肌层较厚及管腔>8个红细胞直径的血管不计数。微血管密度(MVD)计数参照Weinder法[5],即在低倍镜下选择肿瘤微血管数量最丰富的区域作为“热点”,在400倍视野下(0.24 mm2)计数5个不同“热点”区域的血管数,取其平均值作为微血管密度。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0进行数据录入和统计学分析,计数资料以率(%)形式表示,组间差异性比较应用χ2检验和Fisher确切概率法,计量资料则以x±s的形式表示,组间比较应用t检验或秩和检验, TGF-β2表达与CD105-MVD表达的关系采用Spearman等级相关处理,P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果 2.1 TGF-β2在卵巢浆液性癌中的表达及其与临床病理参数的关系

50例卵巢浆液性癌中,41例TGF-β2表达阳性,阳性率为82%,见图 2。TGF-β2在Ⅲ~Ⅳ期的阳性表达率显著高于Ⅰ~Ⅱ期(P < 0.05),在淋巴结转移组中的阳性表达率显著高于无淋巴结转移组(P < 0.05),TGF-β2阳性表达与患者年龄及组织学分级无关(P>0.05)。TGF-β2与临床病理参数的关系具体见表 1

A.卵巢低级别浆液性癌;B.卵巢高级别浆液性癌。 图 2 TGF-β2在卵巢浆液性癌中的表达(×200, 0.95 mm2) Fig 2 Expression of TGF-β2 in serous ovarian carcinoma(×200, 0.95 mm2)
表 1 卵巢浆液性癌中CD105-MVD和TGF-β2表达与临床病理参数的关系 Tab 1 Relationship between CD105-MVD, TGF-β2 expression and clinicopathological parameters in serous ovarian carcinoma
临床病理参数 例数 CD105-MVD t P TGF-β2 χ2 P
- + 阳性率/%
年龄/岁 -1.92 0.061 1.82 0.253
    <50 18 10.42±2.21 5 13 72.2
    ≥50 32 11.51±1.74 4 28 87.5
病理分级 -2.52 0.012* 2.51 0.191
    低级别 12 9.50±2.27 4 8 66.7
    高级别 38 11.63±1.58 5 33 86.8
FIGO分期 -5.26 < 0.001* 6.06 0.022
    Ⅰ~Ⅱ 16 9.07±1.52 6 10 62.5
    Ⅲ~Ⅳ 34 12.08±1.32 3 31 91.1
淋巴结转移 -5.96 < 0.001 5.76 0.025
    无 21 9.61±1.67 7 14 66.7
    有 29 12.20±1.38 2 27 93.1
注:*:秩和检验;★:Fisher确切概率法。
2.2 CD105在卵巢浆液性癌中的表达及其MVD与临床病理参数的关系

CD105在新生血管内皮细胞的胞膜或胞浆中表达,呈棕黄色染色,见图 3。CD105-MVD在卵巢浆液性癌中为11.12±1.97,且高级别组显著高于低级别组(P < 0.05),Ⅲ~Ⅳ期组显著高于Ⅰ~Ⅱ期组(P < 0.05),淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组(P < 0.05);CD105阳性表达与患者年龄无关(P>0.05)。CD105-MVD与临床病理参数的关系具体见表 1

A.卵巢低级别浆液性癌;B.卵巢高级别浆液性癌。箭头示微血管。 图 3 CD105在卵巢浆液性癌中的表达(×200, 0.95 mm2) Fig 3 Expression of CD105 in serous ovarian carcinoma(×200, 0.95 mm2)
2.3 TGF-β2与CD105-MVD在卵巢浆液性癌组织中表达的相关性

TGF-β2阳性表达组的CD105-MVD明显高于阴性表达组,CD105-MVD的中位值为11.2,根据此值将CD105-MVD分为两组,根据Spearman等级相关分析结果显示TGF-β2与CD105-MVD在卵巢浆液性癌组织中表达呈显著正相关(r=0.570,P < 0.05)。见表 2

表 2 卵巢浆液性癌中CD105-MVD和TGF-β2表达的相关性 Tab 2 Correlation of CD105-MVD and TGF-β2 expression in serous ovarian carcinoma
CD105-MVD 例数 TGF-β2 r P
- +
< 11.2 23 7 16 0.570 < 0.001
≥11.2 27 2 25
3 讨论

肿瘤细胞可分泌多种生长因子,包括TGF-β,通过诱导血管生成来加速肿瘤的发展[2]。TGF-β由四种亚型组成,TGF-β2作为TGF-β在人体内的主要存在形式,已被证实在多种肿瘤中过表达,包括胃癌、结肠癌、乳腺癌等,并与肿瘤进展及不良预后相关[6-8],抑制TGF-β2可明显抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移[9-10],提示TGF-β2可作为肿瘤有价值的预后指标及肿瘤治疗的新靶点之一。Zhou等[11]研究发现TGF-β2在卵巢癌组织中的表达显著高于正常卵巢组织,并与患者的不良预后有关,特别是在浆液性、低分化和晚期卵巢癌中,提示TGF-β2可能是卵巢癌发生、发展及预后不良的重要标志物。然而,TGF-β2在卵巢浆液性癌中的研究尚不多见。本研究中我们采用免疫组化法检测了50例卵巢浆液性癌中TGF-β2的表达情况,结果显示TGF-β2在浆液性癌中过表达,且与FIGO分期及淋巴结转移有关(P < 0.05),提示TGF-β2的过表达可能与卵巢浆液性癌的进展、转移有关。

CD105目前被认为是肿瘤新生血管最有价值的特异性标记物,MVD是反映肿瘤新生血管生成情况最直观形象的方法。利用CD105标记的MVD已广泛应用于宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤的评价中,并与患者的生存期有关,可作为独立的预后指标,已成为肿瘤治疗的新靶点之一[12-13]。Sopo等[14]指出高MVD是卵巢恶性肿瘤的重要特征。顾沛玲等[15]研究发现CD105-MVD在卵巢癌组织中表达水平明显高于正常卵巢组织,并与卵巢癌的分化程度、淋巴结转移及FIGO分期有关。本研究显示CD105在卵巢浆液性癌的新生血管内皮中表达,CD105-MVD与癌组织的病理分级、FIGO分期及淋巴结转移有关(P < 0.05),提示高CD105-MVD可能与卵巢浆液性癌的恶性程度、进展及转移有关。近来Ollauri-Ibáñez等[16]研究显示CD105高表达并不能提高血管生成率,它在血管生成过程中阻止血管成熟和稳定,导致肿瘤血管质量更差,促进肿瘤细胞向血管内渗和转移,但并不影响肿瘤的大小,其还指出肿瘤血管功能受损导致肿瘤更加缺氧,刺激肿瘤细胞分泌多种生长因子,可能通过诱导血管生成来加速肿瘤的发展以及获得更具侵略性的表型,这也进一步证实了实体肿瘤中高水平的CD105与肿瘤转移、较差的预后相关,以及抗CD105治疗可抑制肿瘤的转移。

CD105是TGF-β超家族成员的辅助受体,可与TGF-β1和TGF-β3结合,形成配体-受体复合物进行信号的转导。Li等[17]发现CD105通过抑制TGF-β1的信号转导而对抗TGF-β1对血管内皮细胞的增殖抑制作用,进而促进肿瘤血管生成。本研究中TGF-β2阳性表达组的MVD明显高于阴性表达组,TGF-β2的表达和CD105-MVD呈正相关(r=0.570,P < 0.05),表明在卵巢浆液性癌中TGF-β2可能是一个直接促进肿瘤血管生成的因子和CD105一起在肿瘤血管的发生中发挥重要作用。目前对TGF-β2在卵巢癌尤其是浆液性癌组织中的表达及其对肿瘤血管生成的研究比较少见,TGF-β2与受体复合物的结合形式、TGF-β2异常表达的信号通路、新生血管内皮细胞表达的CD105是否直接由TGF-β2诱导以及CD105调节TGF-β2生物学活性的具体机制等问题仍值得进一步探讨。

综上所述,TGF-β2和CD105在肿瘤新生血管生成中起重要作用,且二者与卵巢浆液性癌的病情进展密切相关,联合检测TGF-β2与CD105-MVD有助于判断卵巢浆液性癌的生物学行为和预后评估。

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刘远远, 姜丹, 刘畅, 于水, 张嘉栗, 王梦瑶, 邹娜
LIU Yuanyuan, JIANG Dan, LIU Chang, YU Shui, ZHANG Jiali, WANG Mengyao, ZOU Na
TGF-β2和CD105在卵巢浆液性癌组织中的表达及临床意义
Expression and clinical significance of TGF-β2 and CD105 in ovarian serous carcinoma
大连医科大学学报, 2022, 44(1): 35-39.
Journal of Dalian Medical University, 2022, 44(1): 35-39.
通信作者
邹娜,主任医师。E-mail:408363000@qq.com.

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